Успенско-Николаевский собор находится на территории Марфо-Мариинского монастыря. Это самое старое здание из сохранившихся в Белгороде.
Построен собор был в промежутке между 1692 и 1703 годами. Его велел построить сам Петр Первый и дал для этих целей сто рублей. Записка с его указом до сих пор хранится в соборе. Окончательно здание было возведено к 1709 году.
После 1917 года собор закрыли, с 1933 по 1937 годы здесь была тюрьма, а в 50–80-х годах XX века – хлебозавод. В 1993 году при храме был основан Марфо-Мариинский женский монастырь.
В мае 1998 года собор был передан Русской православной церкви, начались реставрационные работы. Восстановление закончилось 26 декабря 2005 года, тогда же собор освятили.